肝癌是影响我国居民健康的重要疾病，平均每年新发肝癌42.3万例。肝移植是肝癌最有效的根治性手段之一，然而肝移植术后肿瘤复发率仍然高达20.0%～57.8%。循环肿瘤细胞（CTCs）是肝移植后肝癌复发的主要来源，然而近年来研究显示即使CTCs阳性，仍有一部分肝癌肝移植患者能保持长期无瘤生存。因此，解析CTCs分子特征，区分特征性亚群对揭示肝移植术后肝癌复发机制具有重要意义。然而现有的CTCs检测技术仅能提供CTCs数量信息，对于CTCs的分子特征，尤其是组学信息仍缺乏有效的分析手段。单细胞分析以单个细胞的分辨率阐述细胞与细胞间关键差异，为疾病进程、亚型分类、谱系示踪等分析提供重要方法。特别是第二代测序技术的出现，进一步推动了单细胞的组学分析。当前的单细胞分析方法存在细胞利用率低、测量灵敏度准确度不佳等问题。微流控技术的发展大大提高了单细胞分离与操控效率，同时因其与细胞体积相适应，具有反应起始浓度高，试剂消耗量小的优点，在CTCs捕获中具有明显优势。因此，建立基于微流控技术的肝癌CTCs分离与单细胞测序技术体系，是探索肝移植术后肝癌复发机制、提出精准干预措施亟待解决的技术难题。

肝移植术后肝癌复发的关键因素主要在于CTCs的再定植与移植肝免疫微环境的重塑之间的相互作用，即CTCs的“归巢”效应。规范术后随访、动态评估CTCs变化是精准预警、早期诊断肿瘤复发的重要途径。建立肝癌CTCs检测技平台，指导术后复发预警及精准治疗，需要从如下方面进行完善优化。首先，降低CTCs检测成本、提高患者依从性，是发挥CTCs液体活检优势的保障，具有重要应用价值。其次，建立高效的CTCs抗原标志鉴定分析平台，是区分和去除背景细胞，进行高选择性分离的依据。三，精准的CTCs分离与提取技术，是实现单细胞测序的前提，目前仍缺少一种简易、灵敏、准确的单细胞操控平台，实现快速、高效的单细胞转录组测序文库构建。鉴于CTCs在肝癌复发的重要价值，迫切需要建立系列CTCs分析技术体系，能够对肝癌CTCs从快速低成本检测到精准的单细胞测序进行分层分析，为阐述肝癌肝移植术后复发机制和指导精准医疗提供理论依据。

团队为肝胆外科专业医生牵头，整合临床、基础医学、理工多学科人才和资源，致力于开发基于微流控技术的微量细胞捕获与高效鉴定分析技术，在微量细胞分选与低压电穿孔等方面具有一定的经验积累。1）在肝癌治疗方面有丰富的临床一线工作经验，能够完成包括肝移植在内的所有肝癌外科干预措施以及综合治疗。并且参与肝癌二、三级预防工作，切实了解提高肝癌肝移植术后随访质量所面临的实际困难。2）我们从事医工交叉研究多年，特别是在微流控技术生物医学应用研究方面积累了一定的经验和知识储备。能够独立完成图形设计、模具制作等硬件研发，进行核心技术的优化。3）拥有独立的分子生物学实验室，对肝癌发生发展的分子机制有深入的探索和认知，能够为CTCs分析提供理论支撑，并且提出新的应用需求，不断探索肝癌复发转移的分子机制。

1）目标市场：

a. 临床市场：省市肿瘤医院和二级以上综合性医院等，可为患者提供快速的CTC检测方案。

b. 科研市场：医院内的研究科室、高校、研究所等，进行肿瘤相关的分子生物学基础研究。

c. 体检市场：临床第三方检验机构及体检机构，可提供个性化的肿瘤检测服务。

2）市场规模，循环肿瘤细胞检测市场容量巨大：

2015～2020年中国肝癌平均每年发病42.3万例，占全球年新增病例总数的42.5%，福建省肝癌发病人数更是高达33.59/10万；以平均每人检测1.5次，每次1000元计算，全国市场容量新增保守估计＞ 6.3亿元/年（42.3万*0.1*1.5）。通过以往的研究，循环肿瘤细胞在临床中的应用价值有目共睹，国内已有多家企业正在研发同类产品，其研发目标一致，均为体外诊断外周血肿瘤细胞，但核心技术各不相同各有优劣，因此存在一定的竞争压力，机遇与挑战并存。

要求项目负责人具有高级职称，从事肝癌肝移植临床工作，能够为项目开展提出应用需求，保障技术研发围绕临床问题进行。并且具有医工交叉研究经验积累，能够协调跨学科合作。研发团队应当具有微流控技术相关研究基础以及一定的设备开发能力。项目时限为三年。